單細胞轉(zhuǎn)錄組測序（scRNA-seq）技術(shù)作為一項革命性的生物學(xué)工具，讓人們更直觀的認(rèn)識到不同的細胞亞群和狀態(tài)。但由于凍存組織無法制備高質(zhì)量的細胞懸液以及細胞形狀不規(guī)則，細胞體積較大的無法直接通過scRNA測序來分析。

這時，單細胞水平上的核轉(zhuǎn)錄組測序（snRNA-seq）應(yīng)運而生，帶來了一種新的解決方案。單細胞核轉(zhuǎn)錄組測序就是把組織抽核，制備成單細胞核懸液進行核轉(zhuǎn)錄組測序。大大減少了處理的難度，加速了人類對疾病發(fā)生發(fā)展探索的步伐。

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強強聯(lián)合，助力單細胞核測序時代

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實驗步驟

1) 將新鮮冷凍的人腦組織進行解離并過濾制成核懸液。

2) 使用單細胞柔性分選系統(tǒng)Pala 進行核分選后，進行計數(shù)和成像以確定細胞數(shù)量和碎片清除效率。

3) 計數(shù)后的核稀釋至300,000個/ml , 每次添加600μl懸液至Pala細胞芯片中，進行大量細胞分選模式。分析并根據(jù)FSC（前向散射）/ALL（軸向光損失）和FSC/PI圖表對核進行門控，以去除雙聯(lián)體和碎片。

4) 加載到10X Genomics進行文庫制備和測序

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實驗結(jié)果

1) 對比來自解離的大腦核圖像發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過單細胞柔性分選系統(tǒng)Pala后的組織成功清除了碎片。

2) Pala與標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計數(shù)據(jù)對比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過Pala分選后的細胞數(shù)量更多，每個細胞的平均讀數(shù)更低，每個的總讀數(shù)更多，測序飽和度更低。

3) 從結(jié)果圖中看到，標(biāo)準(zhǔn)主要由少突膠質(zhì)細胞主導(dǎo)，而Pala測序顯示出更多的集群和更均勻的細胞類型分布。

相較于傳統(tǒng)核準(zhǔn)備方法，單細胞柔性分選系統(tǒng)Pala提供了以下優(yōu)勢：

輕柔分選

＜2si 的鞘液壓力，減少了對細胞的物理損傷，特別是脆弱的細胞類型，如神經(jīng)細胞。

去除細胞聚集體和碎片

Pala能夠有效去除細胞聚集體和大小不一的碎片，這對于提高后續(xù)測序步驟中獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)至關(guān)重要。

高細胞恢復(fù)率

Pala分選的比標(biāo)準(zhǔn)多產(chǎn)生了10%的細胞，這表明Pala在分選過程中能夠更有效地恢復(fù)細胞。

簡化操作流程

Pala的設(shè)置和操作相對簡單，使得用戶能夠快速上手并進行實驗，減少了因操作復(fù)雜性帶來的技術(shù)障礙。

減少實驗時間和成本

與傳統(tǒng)的FACS相比，Pala的簡化流程和較低的運行成本

適用于多種類型

適用于多種類型的細胞和核，包括那些難以通過傳統(tǒng)方法分離的細胞類型。

靈活分選

提供三種分選模式，包括單細胞分選，稀有細胞富集，大量細胞分選

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總的來說，單細胞柔性分選平臺Pala 和 10X Genomics強強聯(lián)合，為單細胞RNA測序提供了一個高質(zhì)量、高效率的準(zhǔn)備方案。

更多詳情：https://www.chem17.com/tech_news/detail/3704206.html